细胞培养操作过程要使用超净工作台

 

目的:建立一套适用的培养操作规程,进行无感染条件(tiáo jiàn)下体外细胞(cell)扩大培养。
主体内(in vivo)容:
操作步骤(procedure):
1、紫外灯照射超净工作(gōng zuò)台30分钟(根据实际情况(Condition),可适当增加或缩短照射时间,但时间长一点总比时间短一点安全(security)。)
2、将培养液、PB
  
  S、胰酶放在37℃水浴中温育(每次用多少,温育多少,这样既可节约(jié yuē)温育的时间,又可延长药品的使用期限。生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样,不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器。所有类型的生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。)
3、超净工作(gōng zuò)台照射30分钟后,关闭紫外,打开照明(illumination),打开排风10分钟后再次进入细胞(cell)培养室。压力蒸汽灭菌器是应用**早、效果**可靠、使用**广泛的一种物理灭菌方法。(注意(attention):要打开排风10分钟后再进行操作控制,这样才能保证循环(continue)的风是无菌的。同时还会避免有菌的风直接吹到人的呼吸道中,对人体也有一定的保护作用)
4、戴上口罩及手套(gloves)(有条件的**好戴上帽子,不过也没关系,我们实验室就没戴)
5、用70-75%的酒精擦试实验(experiment)物品(article),然后拿入超净工作(gōng zuò)台中。
6、操作控制时注意(attention)以下几点:尽量在酒精(术语称乙醇)灯火焰附近操作,但如果管子(tube)里有细胞就要离火焰有一定距离了,否则细胞要烫死了;不要重复使用(use)移液管(即吸一次后,就换新的管);不要在敞开的容器上方操作;手上的酒精不要擦太多,否则靠近酒精灯时容易把手烧到(我想非常多人都有过被烧的经历吧);
其实操作控制是很简单的,但一定要仔细。生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时,用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料,使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。尤其是第2步许多人都不注意(attention),细胞(cell)平时放在37℃培养,如果加入的PBS或胰酶温度太低,会对细胞有操伤的,虽然这种损伤短期内察觉不到,但时间长了,就会显现出来。

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