植物组织培养室的灭菌


植物组织培养室的灭菌

  一、目的要求
1、通过实验(experiment),培养学生良好的卫生观念,确立组织培养的无菌意识。
2、掌握(熟知并能运用) 组织培养室的消毒及灭菌方法(method)。
3、掌握培养用具的干热灭菌(fungus)的一般操作技术。

  二、仪器与用具
1、用具:喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品:2%新洁尔灭,高锰酸钾,甲醛(Formaldehyde),70%酒精。

  三、方法步骤
(一)植物组织培养室的灭菌(fungus)
1、地面、墙壁和工作台的灭菌:用2%新洁尔灭喷雾。
(1)配方:取新洁尔灭原液20ml,加水980ml,配成2%新洁尔灭溶液。
(2)方法(method):将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内,进行均匀喷雾。
(3)注意(attention)事项:

  ①墙壁、角落、地面喷雾要均匀,不要遗漏;

  ②注意安全,在喷房顶时,要特别小心,防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌:用甲醛(Formaldehyde)和高锰酸钾熏蒸,1年中熏蒸1-2次。
(1)配方:每立方米空间用甲醛(aldehyde)(Formaldehyde)10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
(2)方法:首先房子要密封。然后在房子中间放一口缸或大烧杯,将称好的高锰酸钾放入缸内,再把已称量的甲醛(aldehyde)溶液慢慢倒入缸内,完毕,人迅速离开,并关上门,密封3天。
(3)注意的地方:

  ①操作前要戴好口罩及手套;

  ②倒入甲醛时要小心,因为甲醛遇到高锰酸钾(Potassium)会迅速沸腾,并产生大量烟雾。压力蒸汽灭菌器具有造型新颖美观、结构合理、功能齐全、加热迅速、灭菌彻底等优点。适用于医疗、科研、食品、等单位对手术器械、敷料、玻璃器皿、橡胶制品、食品、药液、培养基等物品进行灭菌。操作时人要迅速避开烟雾;

  ③3天后,打开房间,搬走费液缸;一周后,方可进入操作。压力蒸汽灭菌器具有造型新颖美观、结构合理、功能齐全、加热迅速、灭菌彻底等优点。适用于医疗、科研、食品、等单位对手术器械、敷料、玻璃器皿、橡胶制品、食品、药液、培养基等物品进行灭菌。
3、在已经熏蒸过的房间(room)内,用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前,再用70%酒精喷雾,使空间灰尘落下。
(二)培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌(湿热灭菌法)
(1)洗涤:把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾干或烘箱干燥。
(2)包扎:用牛皮纸、报纸、纱布或锡(xī)箔纸把玻璃材质器皿和金属器械分别包扎好。生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样,不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器。所有类型的生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。
(3)装水:在压力蒸汽灭菌器内装入一定量的水(水要淹没电热丝)。(切忌干烧!)
(4)装物品:在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶,以及包扎好的玻璃器皿(ware)和金属器械等。
(5)灭菌(fungus):将排气阀开着,加热,直**锅内释放(release)出大量水蒸气(此时水蒸气横向喷出),再关闭阀们;或者当锅内压力升**49.0KPa时,开启排气阀,将锅内的冷空气全部排出。当锅内压力达到108KPa时,温度为121℃时,维持15-20分钟,即可达到灭菌的目的。(若灭菌时间过长,会使培养基中的某些成分变性失效。)切断电源,让灭菌锅自然冷却(cooling)。
注意:
  ①先打开放气阀,再打开锅盖。(以免锅内压力大而爆炸!)

  ②开盖后应尽快转移培养瓶,使培养瓶冷却(cooling)、凝固。一般应将灭菌(fungus)后的培养瓶储藏于30℃以下的室内(indoor),**好储藏在4-10℃的条件下。

  ③某些生长调节剂如IA
  A、Z
  
  T、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的,不能同培养基共同高压灭菌,而需要进行过滤灭菌。
2、培养用具的灭菌——干热灭菌法
(1)玻璃材质器皿的灭菌:湿热灭菌法或干热灭菌法。
(2)金属器械的灭菌(Sterilization):干热灭菌或火焰灭菌法。
(3)布质制品的灭菌(fungus):均用湿热灭菌法。(注意:布质制品绝不能干热灭菌!)
干热灭菌方法:
(1)洗涤:把组织培养用的培养皿、三角瓶、试管、移液管等玻璃器皿进行彻底清洗。(2)包扎:玻璃器皿可放在大的玻璃容器中,金属(Metal)器械可放在金属盒内。
(3)灭菌:器皿在烘箱中,150℃,干热灭菌1小时;或120℃,2小时。灭菌完毕,待冷却(cooling)后取出。

WWW.BOXUN17.CN Corporation of China 2010上海博迅压力蒸汽灭菌器生物安全柜生化培养箱净化工作台高压灭菌器 公司简介 联系我们

客服电话
  • 15157563004
  • 15258505380